色譜柱柱壓過(guò)高是液相色譜(HPLC/UHPLC)分析中常見(jiàn)的問(wèn)題，可能由流動(dòng)相、系統(tǒng)堵塞、色譜柱污染或儀器故障引起。平時(shí)我們?cè)趯?shí)驗(yàn)室進(jìn)行液相色譜的分析測(cè)試時(shí)，如果突然遇到色譜柱柱壓過(guò)高，需要怎么做？
 

　　01立即采取的安全措施
 

　　停止運(yùn)行儀器
 

　　關(guān)閉泵和檢測(cè)器，避免持續(xù)高壓損壞系統(tǒng)。
 

　　佩戴防護(hù)裝備
 

　　處理高壓系統(tǒng)時(shí)需戴護(hù)目鏡和手套，防止液體噴濺。
 

　　02逐步排查原因及解決方法
 

　　柱壓過(guò)高的核心排查邏輯：從外到內(nèi)，由簡(jiǎn)到繁。優(yōu)先排除流動(dòng)相、過(guò)濾器和保護(hù)柱等外部因素，再逐步深入檢查儀器部件和色譜柱。定期維護(hù)和規(guī)范操作是預(yù)防高壓?jiǎn)栴}的關(guān)鍵。
 

　　流動(dòng)相
 

　　◆有無(wú)充分脫氣？
 

　　觀察流動(dòng)相瓶里是否有很多氣泡，氣泡堵塞濾頭會(huì)導(dǎo)致壓力升高，可重新超聲流動(dòng)相或者重新配置流動(dòng)相。
 

　　◆流動(dòng)相是否澄清？是否分層？或者有顆粒物析出？
 

　　建議流動(dòng)相使用前用濾膜過(guò)濾，一般使用0.22μm濾膜過(guò)濾有機(jī)相，0.45μm濾膜過(guò)濾水相或緩沖鹽，防止有鹽的顆粒堵塞管線或者色譜柱導(dǎo)致壓力升高。如看到流動(dòng)相渾濁或分層，需重新配置。
 

　　如果有鹽溶液，超純水溶解緩沖鹽后，再加入有機(jī)相，加入后，需擰緊瓶蓋，大力搖勻，僅僅超聲是不夠的，需要做到充分混勻，防止水相和有機(jī)相未混勻?qū)е碌某龇瀹惓；虿怀龇迩闆r。
 

　　斷開(kāi)色譜柱，排查儀器壓力
 

　　◆卸下色譜柱，用兩通接頭連接泵與檢測(cè)器，以純甲醇/乙腈(低黏度)運(yùn)行系統(tǒng)。
 

　　◆正常壓力：<5 MPa(不同儀器基線值可能略有差異)
 

　　◆高壓持續(xù)：說(shuō)明泵、混合器、管路或檢測(cè)器堵塞，需分段檢查。
 

　　連接保護(hù)柱
 

　　◆若系統(tǒng)壓力正常，依次連接保護(hù)柱、色譜柱，判斷壓力升高的來(lái)源。
 

　　◆保護(hù)柱壓力高：更換保護(hù)柱柱芯，若更換了保護(hù)柱柱芯壓力仍高，說(shuō)明是保護(hù)柱柱套堵了，需更換新的柱套；保護(hù)柱壓力不高，色譜柱壓力高，說(shuō)明是色譜柱導(dǎo)致的系統(tǒng)壓力高，再進(jìn)一步排查。
 

　　色譜柱部分
 

　　◆首先需要檢查色譜柱的規(guī)格，例如長(zhǎng)度、內(nèi)徑、填料粒徑這些參數(shù)，如果粒徑較小且內(nèi)徑較小，需注意此類(lèi)型色譜柱本身壓力就會(huì)偏高一些，如果遇到儀器超壓報(bào)警，關(guān)注是否是儀器耐壓上限低導(dǎo)致的。(ps：各個(gè)系列色譜柱維護(hù)指南、典型壓力及壓力上限可在艾杰爾飛諾美公眾號(hào)自主查詢(xún))
 

　　◆新柱啟用，如果流動(dòng)相起始比例是高比例的鹽溶液(例90%磷酸二氫鉀緩沖鹽：10%乙腈)，需先用同比例的乙腈水(例90%水：10%乙腈)過(guò)渡，防止高比例有機(jī)相立馬轉(zhuǎn)換到高比例鹽溶液造成的鹽析現(xiàn)象。
 

　　◆色譜柱使用一段時(shí)間后導(dǎo)致的壓力升高：如果柱壓緩慢升高，且伴隨峰形展寬或分叉，柱效明顯下降----篩板或柱頭堵塞；如果柱壓驟升-----填料塌陷。
 

　　一般建議反向沖洗色譜柱，使用適當(dāng)溶劑梯度沖洗，嚴(yán)重污染時(shí)，可嘗試強(qiáng)溶劑沖洗；填料塌陷需更換色譜柱；也可反接色譜柱使用看壓力是否符合要求。(具體的沖洗流程各個(gè)色譜柱不盡相同，可在艾杰爾飛諾美公眾號(hào)自主查詢(xún))
 

　　03其他可能原因
 

　　溫度異常
 

　　◆柱溫過(guò)低導(dǎo)致流動(dòng)相黏度升高，壓力升高，適當(dāng)提高柱溫(需參考方法要求及色譜柱耐溫上限要求)。
 

　　◆溫控模塊故障需檢修。
 

　　流速設(shè)置錯(cuò)誤
 

　　檢查方法中流速是否超出色譜柱耐受范圍(如常規(guī)液相色譜柱通常≤1.5 mL/min)。
 

　　樣品殘留
 

　　未過(guò)濾樣品(0.22μm濾膜)或高濃度樣品導(dǎo)致柱頭污染，需加強(qiáng)樣品前處理。
 

　　04預(yù)防措施及日常維護(hù)
 

　　1、使用合適的保護(hù)柱，定期更換保護(hù)柱柱芯。
 

　　2、緩沖鹽流動(dòng)相，色譜柱活化需先用高比例水相過(guò)渡，避免鹽析現(xiàn)象。
 

　　3、色譜柱沖洗及保存：常規(guī)反相柱，需先用高比例水相沖洗，再用高比例有機(jī)相沖洗，然后高比例有機(jī)相保存。需要注意清洗時(shí)，將流速設(shè)置為低于方法流速，長(zhǎng)時(shí)間沖洗比多次沖洗的效果好。
 

　　4、利用固相萃取(Strata-X/Cleanert SPE產(chǎn)品)等樣品制備技術(shù)或配件(Phenex/Clarinert針頭式過(guò)濾器)，盡可能減少進(jìn)入系統(tǒng)和色譜柱上的污染物。
 

　　5、不要讓色譜柱過(guò)載，進(jìn)樣合適的樣品濃度和體積。
 

　　6、記錄壓力基線，記錄新色譜柱初始?jí)毫Γ阌诤罄m(xù)對(duì)比判斷。
 

　　下面來(lái)總結(jié)一下：
 

　　色譜柱壓力過(guò)高的一般排查順序?yàn)?，先排查流?dòng)相，再連接兩通排查儀器及系統(tǒng)壓力，最后排查保護(hù)柱及色譜柱，同時(shí)需要查看溫度及流速的設(shè)置以及是否色譜柱規(guī)格與儀器壓力上限不合適的情況。若自行處理無(wú)效，建議聯(lián)系儀器或色譜柱廠家尋求技術(shù)支持。